Analiza biochemiczna tkanki kalusa w osteogenezie niedoskonałości typu IV. Dowody przemijającej supremodyfikacji w kolagenie typu I i III.

Przeanalizowaliśmy tkankę i komórki ze stacjonarnego i szybko rosnącego hiperplastycznego kalusa od pacjenta z osteogenezą niedoskonałości (OI) typu IV i porównaliśmy wyniki z wynikami zwartej kości i fibroblastów skóry o dopasowanym wiekiem schemacie kontrolnym. Zawartość kolagenu i białka w komórce była niska w tkankach kalusa, a kolagen I i III ulegały nadmiernej modyfikacji, o czym świadczy podwyższony poziom hydroksylizyny. Stopień hydroksylacji lizylu był najwyższy w tych regionach, które wyglądały na niedojrzałych w wyniku badania histologicznego. Hydroksylacja lizylu zbliżyła się do normalnego poziomu w kolagenie ze stacjonarnego kalusa i ze środka rosnącego kalusa. Nie obserwowano przemodelowania kolagenu w zwartych kościach lub hodowlach komórkowych (ani fibroblasty skóry, ani komórki kalusa) od pacjenta. Podniesienie poziomu hydroksylizyny w kolagenie u pacjentów z OI ogólnie przypisuje się mutacjom, które opóźniają tworzenie potrójnej helisy. Nasze obserwacje sugerują, że zmienny stopień modyfikacji kolagenu może wystąpić w wyniku mechanizmów regulacyjnych podczas rozwoju kości i naprawy tkanek. Te mechanizmy mogą być wadliwe u niektórych pacjentów z OI, jak widać w tym przypadku z hiperplastycznym tworzeniem się kalusa

Czynnik stymulujący kolonię granulocytów i makrofagów indukuje wydzielanie cytokin przez ludzkie leukocyty wielojądrowe.

Czynnik stymulujący kolonię granulocytów i makrofagów (GM-CSF) jest znany jako induktor proliferacji i aktywacji funkcjonalnej komórek mieloidalnych. Badanie to zostało przeprowadzone w celu dokładniejszego scharakteryzowania wpływu GM-CSF na leukocyty wielojądrzastkowe (PMN). Korzystając z analizy Northern blot, pokazujemy, że PMN są zdolne do akumulowania mRNA dla różnych cytokin, w tym czynnika martwicy nowotworów-alfa (TNF-alfa); G-CSF i M-CSF, z których wszystkie są zaangażowane w zapalenie i hematopoezę. Testy biologiczne i testy immunologiczne wykazują, że PMN tłumaczy te mRNA, z wyjątkiem TNF-alfa, do białek sekrecyjnych. Jednakże ekspresja tych cytokin zależy od stymulacji przez sygnały egzogenne, preferencyjnie dostarczone przez limfokin GM-CSF pochodzący z limfocytów T. Stymulacja hematopoezy i amplifikacja mechanizmów obronnych po aktywacji limfocytów T może zatem obejmować nie tylko monocyty, ale także PMN, typ komórek wcześniej uważany za nieaktywny biosyntetycznie.

Amplifikacja zmienionych samoreaktywnych odpowiedzi limfocytów T cytopla-tycznych przez klonowane, allospecyficzne ludzkie komórki Th.

Badano wpływ klonowanej allospecyficznej ludzkiej komórki Th, zwanej 86, na wytwarzanie in vitro zmienionych autoreaktywnych cytolitycznych limfocytów T (CTL). Wykorzystując indukcję zmienionej haptenowo autoreaktywnej CTL jako modelu dla odporności komórkowej zależnej od guza lub nowotworu, ustaliliśmy, że obecność niewielkiej liczby komórek klonu 86 znacznie zwiększyła wytwarzanie zmodyfikowanych haptenowo autoreaktywnych CTL. Komórki zabójcze indukowane należą do podgrupy CD4-, CD8 +, są specyficzne dla autologicznych stymulowanych haptenem komórek obecnych w hodowli i są ograniczone do MHC klasy I. CTL indukowane w tych warunkach hodowli są łatwo ekspandowane w obecności IL-2 z utrzymaniem skutecznego i określonego zmienionego zabijania. Interesujące, komórki klonu 86 preferencyjnie wzmacniają wzrost komórek T CD8 + i selektywnie amplifikują zmienioną auto-cytolizę, ale nie aktywność komórek NK. Chociaż komórki klonu 86 in vitro pośredniczą w pomocy w generowaniu CTL poprzez wytwarzanie limfokin (IL-4, ale niewiele IL-2), można sobie wyobrazić strategie immunoterapeutyczne dla chorób człowieka, które obejmują adoptywne przeniesienie komórek Th funkcjonalnie analogicznych do klonu 86.

Nieznaczny antygen zgodności tkankowej HY ulega ekspresji na ludzkich hematopoetycznych komórkach progenitorowych.

Polimorficzne pomniejsze transplantacyjne antygeny prawdopodobnie odgrywają ważną rolę we wszczepianiu odrzucanych przeszczepów szpiku kostnym za pośrednictwem układu immunologicznego. Mapowanie tych antygenów na hematopoetycznych komórkach progenitorowych (HPC) jest ważne, ponieważ te determinanty antygenowe mogą służyć jako struktury docelowe w procesie odrzucania, a ostatecznie otwiera możliwość dopasowania do tych antygenów. Zastosowanie cytotoksyczności komórkowej z cytotoksycznymi limfocytami T zależnymi od HY jako komórek efektorowych, zależne od dawki zahamowanie wzrostu do 100% mieloidalnej (CFU-GM), erytroidalnej (BFU-E) i wielotorowej (CFU-GEMM) HPC dawców męskich, co wskazuje na ekspresję antygenu HY w tych komórkach progenitorowych. Przeciwnie, hamowanie względnie dojrzałych erytroidalnych i mieloidalnych komórek progenitorowych wynosiło tylko 40-50%, co wskazuje, że rozpoznanie antygenu HY zmniejszyło się podczas dojrzewania erytroidalnego i mieloidalnego HPC. Nasze wyniki pokazują, że antygen HY można rozpoznać w HPC jako cel dla cytotoksycznych odpowiedzi komórek T. Może to być ważne w przypadku odrzucania przeszczepu przez przeszczepione szpik kostny męski przez biorców płci żeńskiej.

Powszechny neoepitop powstaje, gdy reaktywne centrum inhibitora C1 jest rozszczepiane przez kallikreinę osocza, aktywowany fragment czynnika XII, esterazę C1 lub elastazę neutrofilową.

Reaktywne centrum inhibitora C1, inhibitor proteazy osocza należącego do nadrodziny serpiny, znajduje się w pętli peptydowej, która jest wysoce podatna na cięcie proteolityczne. W przypadku kalikreiny osoczowej, C1s i beta-czynnika XIIa, rozszczepienie zachodzi w reszcie P1 miejsca reakcji (Arg444); z elastazą neutrofilową odbywa się w pobliżu P1, prawdopodobnie przy reszcie P3 (Val442). Po tych rozszczepieniach inhibitor C1 jest inaktywowany, a jego konformacja jest modyfikowana. Ponadto, in vivo, rozszczepiony inhibitor C1 jest usuwany ze strumienia krwi szybciej niż nienaruszony serpin, co sugeruje, że proteoliza demaskuje miejsca odpowiedzialne za rozpoznanie komórkowe i wychwyt rozszczepionego inhibitora. W omawianym tu badaniu, pokazujemy, stosując MAb, że identyczny neoepitop jest tworzony na inhibitorze C1 po rozcięciu eksponowanej pętli przez kalikreinę osoczową, C1s, czynnik beta XIIa i przez elastazę neutrofilową.

Ludzki rekombinowany czynnik stymulujący wzrost kolonii granulocytów i makrofagów oraz interleukina 3 powodują uwalnianie histaminy przez bazofil.

Wykazano, że czynniki uwalniające histaminę (HRF) są uwalniane z różnych ludzkich komórek, w tym limfocytów T i makrofagów pęcherzykowych. Rozważaliśmy możliwość, że znane cytokiny mogą posiadać taką aktywność na ludzkich bazofilach i / lub komórkach tucznych, a zatem badano preparaty ludzkiej rekombinowanej IL3, IL4, IL5, czynnika stymulującego kolonię granulocytów (G-CSF) i kolonii granulocytów-makrofagów. -stymulujący czynnik (GM-CSF) na panelu dawców bazofili. IL3 i GM-CSF posiadały znaczącą aktywność uwalniającą histaminę odpowiednio u 8 z 10 i 12 z 14 osobników. W każdym przypadku można było wykazać odpowiedź na dawkę. IL 4 i G-CSF nie miały takiej aktywności, podczas gdy IL 5 wykazywała aktywność jedynie u 2 spośród 14 badanych dawców. Wnioskujemy, że IL3 i GM-CSF reprezentują dwa skuteczne HRF i sugerują, że HRF, jako wyizolowany w oparciu o aktywność uwalniającą histaminę, prawdopodobnie będzie heterogenny pod względem tożsamości molekularnej. To, czy wcześniej opisane HRF odnoszą się konkretnie do IL3 lub GM-CSF, musi czekać na analizę sekwencji pierwszorzędowego HRF i / lub badań z monospecyficzną surowicą odpornościową.

Ekspresja czynnika stymulującego kolonię makrofagów i genów c-fms w ludzkich ostrych komórkach białaczki mieloblastycznej.

Czynnik stymulujący wzrost kolonii makrofagów (CSF-1; M-CSF) jest czynnikiem wzrostu niezbędnym do wzrostu i różnicowania jednojądrzastych fagocytów. W oddziaływaniu CSF-1 pośredniczy wiązanie ze specyficznymi receptorami powierzchniowymi o wysokim powinowactwie kodowanymi przez gen c-fms. Ekspresję genu CSF-1 i c-fms badano w świeżych ludzkich ostrych mieloblastycznych komórkach białaczkowych za pomocą hybrydyzacji Northern blot przy użyciu sond cDNA. Transkrypty CSF-1 o wielkości 4,0 kb wykryto w 10 z 17 przypadków ostrej białaczki mieloblastycznej (AML), podczas gdy transkrypty c-fms wykryto w 7 z 15. W pięciu przypadkach obserwowano ekspresję CSF-1 i c-fms, oraz w pięciu innych przypadkach nie wyrażono żadnego genu. Hybrydyzacja in situ wykazała, że transkrypty dla CSF-1 były obecne w 70-90% komórek w każdym z trzech badanych przypadków, podczas gdy mRNA c-fms wykryto w 40-70% komórek. Konstytucyjna ekspresja transkryptów CSF-1 była związana z wytwarzaniem białka CSF-1, chociaż wykrywalne ilości CSF-1 nie były wydzielane, chyba że komórki były eksponowane na ester forbolu. Te wyniki pokazują, że mieloblasty białaczkowe z podzbioru pacjentów z transkryptami ekspresyjnymi AML dla obu genów receptora CSF-1 i CSF-1, często w tych samych komórkach białaczkowych in vitro.

Grasica w miastenii gravis. Izolacja linii limfocytów T specyficznych dla nikotynowego receptora acetylocholiny z grasicy u pacjentów z miastenią.

Uważa się, że grasica odgrywa kluczową rolę w patogenezie miastenii rzekomej (MG). Zgodnie z poprzednią hipotezą, MG jest inicjowana w obrębie grasicy przez immunogenną prezentację lokalnie wytwarzanego nikotynowego receptora acetylocholinowego (AChR) potencjalnie autoimmunologicznym komórkom T. Dane 10 kolejnych pacjentów MG wykazują dwie krytyczne cechy grasicy MG, które wspierają koncepcję intratymicznej aktywacji autoreaktywnych limfocytów specyficznych dla AChR. Morfologicznie grasica wykazała hiperplazję limfocytarną w dziewięciu przypadkach i łagodny grasiczak w jednym przypadku. Najważniejszą cechą ujawnioną w analizie immunohistologicznych podwójnych markerów było ścisłe powiązanie komórek mioidalnych (wytwarzających antygen) z komórkami siatkówki wzajemnie odwzorowującymi (potencjalnie komórkami prezentującymi antygen), które otoczono limfocytami T3 + w rdzeniu grasicy. Wszystkie 10 grasiczy zawierało limfocyty T reaktywne z AChR. Było to w przeciwieństwie do obwodowego przedziału odpornościowego (krwi), gdzie tylko u 3 z 10 pacjentów obserwowano znaczące odpowiedzi limfocytów T na AChR. Linie komórkowe T specyficzne dla AChR można ustalić z 8 z 10 grasców, wszystkich członków podzbioru pomocniczego / induktora, jak wskazano przez ekspresję markerów T3 i T4.Images

Wpływ zmienności całkowitego spożycia energii i składu diety na regulację lipolizy komórek tłuszczowych u osób o idealnej wadze.

Utrzymujące wagę, bogate w tłuszcz, "ostrożne", bogate w węglowodany, a także dietę o obniżonej energii (300 kcal / d) były karmione kolejno przez 7 d do 12 zdrowych mężczyzn o idealnej masie ciała w warunkach oddziału metabolicznego. Pod koniec każdego okresu izolowane komórki tłuszczowe przygotowywano z podskórnej tkanki tłuszczowej brzusznej i inkubowano in vitro w nieobecności lub obecności deaminazy adenozyny, samodzielnie lub w połączeniu z różnymi hormonami i środkami lipolitycznymi lub antylipolitycznymi. Różnice w całkowitym spożyciu energii i składzie diety miały charakterystyczny i specyficzny wpływ na lipolizę komórek tłuszczowych in vitro. Wysoka dieta węglowodanowa i ostrożna powodowała niskie wskaźniki niestymulowanego uwalniania glicerolu i zaburzonego działania insuliny w obecności deaminazy adenozyny (320 mU / ml). Diety o wysokiej zawartości tłuszczu i energii charakteryzowały się wysokim wskaźnikiem niestymulowanego uwalniania glicerolu. Wrażliwość antylipolizy na insulinę i prostaglandynę E2 była 10 do 200 razy mniejsza odpowiednio w przypadku diety o obniżonej wartości energetycznej niż na bogatej w tłuszcze. Wpływ powyższych katecholamin alfa-2 i beta-adrenergicznych oraz N6-fenyloizopropyloadenozyny nie miał wpływu na poprzednie diety.

Rola białek nośnikowych w surowicy w metabolizmie obwodowym i rozmieszczeniu tkankowym hormonów tarczycy w rodzinnej hipertoksyksymii dysbbuminowej i wrodzonym podwyższeniu globuliny wiążącej tyroksynę.

Aby zbadać rolę globuliny wiążącej tyroksynę (TBG) i albuminy w dostępności hormonów tarczycy do tkanek obwodowych, wykonano kompleksowe badania kinetyczne tyroksyny (T4) i trijodotyroniny (T3) u ośmiu osób z rodzinną hipertoksyksemią dysbbuminową (FDH) , u czterech osób z odziedziczonym nadmiarem TBG iu 15 osób zdrowych. U osób z wysokim odsetkiem TBG redukcja klirensu osoczowego T4 i T3 (odpowiednio o 51% i 54%) wiązała się z normalną codzienną produkcją; Objętości dystrybucji T4 i T3 zostały znacznie zmniejszone. U osób z FDH klirens T4 był mniej zmniejszony (o 31%) niż w przypadku wysokiego TBG; w konsekwencji wskaźnik produkcji T4 znacznie wzrósł (o 42%); Objętości dystrybucji T4 i T3 i szybkość klirensu T3 pozostały niezmienione. Zwiększona produkcja obwodowa T3 w FDH (o 24%) wskazuje, że T4 związany z nieprawidłową albuminą jest bardziej dostępny dla tkanek niż T4 przenoszony przez TBG, co sugeruje ważną rolę albuminy w dostępności T4 na peryferiach.